БАЗОФИЛЬНЫЙ ТЕСТ

Расстановка ударений: БАЗОФИ`ЛЬНЫЙ ТЕСТ

БАЗОФИЛЬНЫЙ ТЕСТ (греч. basis основа + philia склонность; син. тест Шелли) - метод диагностики специфической сенсибилизации организма, основанный на дегрануляции базофилов после добавления к ним специфического аллергена (рис.). Предложен Шелли (W. B. Shelley) в 1962 г. В последующие годы Б. т. использован различными исследователями для изучения пыльцевой, лекарственной и пищевой аллергии. Б. т. получил признание как дополнительный тест для диагностики аллергических заболеваний и как метод выявления аллергических антител человека. Базофильные лейкоциты крови подобно тканевым тучным клеткам принимают участие в освобождении гистамина, гепарина, медленно реагирующей субстанции и серотонина. Считают, что реакция дегрануляции базофилов крови свидетельствует о наличии реакции аллерген - антитело (см. Антиген - антитело реакция). Природа антител, обусловливающих реакцию дегрануляции, остается неясной. Наиболее вероятно, что это реагины (см. Антитела, аллергические).

Рис. Прямая реакция дегрануляции базофилов при аллергии к пенициллину (слева - неизмененный базофил)

Рис. Прямая реакция дегрануляции базофилов при аллергии к пенициллину (слева - неизмененный базофил)

Существует две разновидности Б. т.: 1) прямой тест, при к-ром реакция дегрануляции воспроизводится на спонтанно сенсибилизированных базофилах больного (лейкоциты больного + аллерген); 2) непрямой тест, при к-ром реакция дегрануляции воспроизводится на базофилах кролика или здорового человека (лейкоциты + исследуемая сыворотка больного + аллерген); в реакции лучше использовать лейкоциты кролика, содержащие много базофилов (4-12%). Непрямой тест получил большее распространение.

Материалы, используемые для прямого Б. т.: 1) свежая кровь больного; 2) аллерген, повышенную чувствительность к к-рому предполагается исследовать; 3) фиксирующий раствор (6 мл этанола, 2 мл хлороформа и 2 мл ацетона); 4) целлюлозные мембранные фильтры.

Методика прямого базофильного теста. Смешивают 0,25 мл гепаринизированной крови больного и 0,025 мл аллергена. Через 5 мин. к 0,1 мл смеси добавляют охлажденный фиксирующий раствор, к-рый разрушает эритроциты, оставляя интактными лейкоциты. После фиксации в течение ночи при t° 4° лейкоциты ресуспензируют и фильтруют через целлюлозные мембранные фильтры в течение 20 мин. При этом базофилы остаются на фильтрах. Фильтры окрашивают в течение 30 сек. раствором толуидинового синего, обезвоживают в этаноле и просветляют в ксилоле. Подсчитывают 20 базофилов. Их классифицируют по размеру, окраске, числу и локализации базофильных гранул. Для "истощенных" базофилов характерно: 1) небольшое количество гранул; 2) небольшие слабо окрашенные гранулы; 3) значительное количество гранул, расположенных за пределами клетки. Тест считается положительным, если "истощено" (дегранулирует) больше половины базофилов.

Материалы, используемые для непрямого Б. т.: 1) свежая или сохраняемая при t° -20° сыворотка крови больного; 2) аллерген; 3) концентрированная взвесь лейкоцитов кролика, полученная при центрифугировании гепаринизированной крови со скоростью 3000 об/мин в течение 5 мин. в тонких стеклянных пробирках или полиэтиленовых трубочках; 4) предметные стекла, окрашенные раствором нейтральрота. Для каждого аллергена опытным путем подбирают ту концентрацию, к-рая не вызывает неспецифических изменений базофилов.

Методика непрямого базофильного теста. На окрашенное нейтральротом предметное стекло наносят одинаковое количество (по 0,005 мл) лейкоцитарной взвеси, исследуемой сыворотки больного и аллергена. Предметное стекло накрывают покровным, края к-рого смазаны вазелином, и ставят на 10 мин. в термостат (при 37°). Параллельно ставят контрольные пробы: 1) исследуемая сыворотка со взвесью лейкоцитов (чтобы исключить неспецифическую дегрануляцию); 2) взвесь лейкоцитов с аллергеном. Реакцию наблюдают под микроскопом с иммерсией. Считают не менее 20 базофилов. Основные признаки повреждения базофилов следующие: разбухание и потеря сферичности, гранул о лизис, выход гранул из клеток. Полное разрушение клетки с выходом гранул в окружающую среду ("взрывчатая" дегрануляция) наблюдается крайне редко.

Выделяют три степени реакции дегрануляции: 1) слабая реакция (+) - дегрануляция при базофильном тесте превышает таковую в контроле на 10%; 2) умеренная реакция (++) - превышение дегрануляции в контроле на 15%; 3) резко положительная (+++) - превышение дегрануляции в контроле на 20% и более. Критерием положительного Б. т. можно считать исчезновение гранул более чем у 70% базофилов. Ценность представляют только четко положительные результаты, а отрицательные не исключают состояния повышенной чувствительности к данному аллергену.

у См. также Аллергические болезни (диагностика).

Библиогр.: Ишимова Л. М. и Зеличенко Л. И. Аллергические реакции форменных элементов крови и их значение для диагностики, в кн.: Аллергич. заболевания у детей,под ред. М. Я. Студеникина и Т. С. Соколовой, с. 144, М., 1971; Польнер А. А. Реакция дегрануляции базофильных лейкоцитов при аллергии к растительной пыльце, Тер. арх., т. 40, № 2, с. 103, 1968; Shelley W. B. New serological test for allergy in man, Nature (Lond.), v. 195, p. 1181, 1962; он же, Indirect basophil degranulation test for allergy to penicillin and other drugs, J. Amer. med. Ass., v. 184, p. 171, 1963.

С. М. Орлов.

Источники:

1. Большая медицинская энциклопедия. Том 2/Главный редактор академик Б. В. Петровский; издательство «Советская энциклопедия»; Москва, 1975.- 608 с. с илл., 8 л. вкл.