АНТИДИМФОЦИТАРНАЯ СЫВОРОТКА

Расстановка ударений: АНТИДИМФОЦИТА`РНАЯ СЫ`ВОРОТКА

АНТИДИМФОЦИТАРНАЯ СЫВОРОТКА (AJIC, ALS; греч. anti- против + лимфоцит[ы]) - иммунная сыворотка, содержащая различного рода антитела к лимфоидным клеткам, преимущественно к лимфоцитам.

Название АЛС сопровождается наименованием вида животного, от к-рого получена сыворотка, а также наименованием вида, против ткани к-рого выработаны антитела, напр.: кроличья антикрысиная, лошадиная античеловеческая и т. п.

АЛС впервые получена И. И. Мечниковым в 1899 г. при иммунизации морской СВИНКИ селезеночной тканью крысы. А. М. Безредка в 1900 г. продемонстрировал цитотоксическое действие АЛС на лимфоидные клетки in vitro; позднее было показано лейко- и лимфопеническое действие АЛС in vivo, а также ингибирующее действие на развитие реакций гиперчувствительности замедленного типа. Последние свойства АЛС привлекли внимание трансплантологов, поскольку появилась возможность воздействия на реакции трансплантационного иммунитета, к-рые опосредуются через лимфоидные клетки. Интенсивное изучение и использование АЛС началось с 1963-1964 гг., когда Вудрафф и Андерсон (М. Woodruff, N. Anderson) добились значительного удлинения сроков выживания аллогенного кожного лоскута у крыс при использовании кроличьей антикрысиной АЛС.

Получение. АЛС получают путем иммунизации животных одного вида (продуцент) лимфоидными клетками другого вида (донор). Продуцентами могут служить: мыши, крысы, морские свинки, собаки и др. Для получения АЛС в лечебных целях в качестве продуцентов используют кроликов, лошадей, иногда обезьян, ослов.

Для иммунизации используют клетки селезенки, лимф, узлов, тимуса, лимфоциты, полученные прижизненно путем дренирования грудного лимф, протока (ductus thoracicus); имеется опыт получения АЛС путем иммунизации тканью миндалин человека. Наибольшей иммунодепрессивной активностью обладают АЛС, полученные иммунизацией клетками тимуса и лимфоцитами грудного лимф, протока.

Иммунизация предусматривает различные схемы; введение может быть внутривенным, внутрибрюшинным, внутримышечным, подкожным; при двух последних антиген вводят в адъюванте Фрейнда; используют комбинированные схемы - внутривенное с последующим подкожным введением антигена; количество лимфоидных клеток, вводимых за одну инъекцию, - 0,2-50 млрд. в зависимости от вида продуцента и его размеров.

Очистка и обработка. В полученных путем кровопускания сыворотках определяются гемагглютинины (и гемолизины) в значительных количествах, удаление к-рых производят одно-двукратной (для экспериментальных целей) или многократной (для лечебных целей) адсорбцией, используя эритроциты донора (20-30% от общего объема сыворотки). Присутствие гемагглютининов и гемолизинов допустимо в титрах менее чем 1:16. Антитромбоцитарные антитела допустимы в титрах, не превышающих 1:8 в реакции связывания комплемента. АЛС, используемую в лечебных целях, инактивируют прогреванием в водяной бане при t° 56° в течение 20-30 мин.

Обработка АЛС может быть закончена выделением активного начала - антилимфоцитарного γ-глобулина, к-рое производят путем этанолового фракционирования или фракционной экстракцией 40% сульфатом аммония с последующим диализом против дистиллированной воды. Дальнейшая обработка с использованием Sephadex G-200 показывает, что большая часть антилимфоцитарной активности локализуется в IgG-фракции.

Активность АЛС характеризуют по комплексу тестов.

1. Увеличение длительности вышивания (пролонгация) кожного лоскута служит показателем собственно иммунодепрессивной активности. Этот тест выполняется на лабораторных животных с учетом выживания аллогенного кожного лоскута в группе, получающей АЛС, и в контрольной группе. Нормальные сроки отторжения аллогенного кожного лоскута 7-8 или 10-13 дней в зависимости от вида лабораторного животного. Активная АЛС увеличивает сроки жизни аллотрансплантата от нескольких дней до нескольких недель.

2. Цитотоксическое действие на лимфоидные клетки: выполняется in vitro по методу Горера - О'Гормана (1957) или его модификациям на лимфоцитах животного-донора с использованием прижизненного красителя трипанового голубого.

3. Угнетение первичного иммунного ответа на тканевой, белковый пли бактериальный антиген; выполняется на мелких лабораторных животных при иммунизации эритроцитами барана, бычьим сывороточным альбумином или культурой бактерий; значительное снижение титров антител у животного, обработанного АЛС, по сравнению с антителообразованием у нормального животного служит показателем активности АЛС. Ингибирующим действием обладает именно антилимфоцитарный λ-глобулин, поскольку нормальный IgG такого эффекта не вызывает.

4. Трансформирующая активность изучается in vitro по способности вызывать бласттрансформацию лимфоцитов (см. Иммунитет трансплантационный). Сравниваются нестимулированные и стимулированные под действием АЛС 2-3-дневные культуры лимфоцитов; учет реакции производится путем морфологического исследования культур или по включению радиоактивного H³-тимидина или C¹⁴-глицина в ДНК или РНК делящихся лимфоцитов.

5. Торможение розеткообразования: лимфоциты человека или мышей будучи смешаны в солевом растворе с эритроцитами барана могут in vitro формировать "розетки" вследствие иммунного прилипания к их оболочке эритроцитов барана. Активная АЛС, введенная человеку или мыши, ингибирует спонтанное "розеткообразование" при инкубации тест-лимфоцитов с эритроцитами барана (90 мин., t° 37°). Чувствительность реакции ингибиции возрастает в присутствии комплемента морской свинки. Сыворотки, предназначенные для клинического использования, испытываются с применением названных тестов на приматах. Первичный отбор производится на низших обезьянах (макаки-резусы, павианы) и окончательный - на шимпанзе.

Практическое применение. В эксперименте показано, что АЛС способна увеличивать сроки выживания аллогенного кожного лоскута у мышей, крыс, кроликов, обезьян. Ареактивность, создаваемая АЛС по отношению к аллотрансплантату, распространяется на вторичный трансплантат и на ксенотрансплантат. АЛС удлиняет также сроки выживания почки и печени, пересаженных крысам и собакам.

Клиническое использование осуществляется пока в двух направлениях. Известны случаи применения АЛС при заболеваниях, в патогенезе к-рых имеется аутоиммунный компонент (острый рецидивирующий ревматизм, ревматоидный полиартрит и др.). При этом наблюдается улучшение состояния, нормализация показателей, характеризующих заболевание (замедление РОЭ, исчезновение болей в суставах, исчезновение выпота в суставные сумки).

В последние годы АЛС и антнлимфоцитарный глобулин широко используют при трансплантации жизненно важных органов, в первую очередь почки. С 1971 г. большинство трансплантаций почки проведено при использовании АЛС в качестве иммунодепрессивного агента.

В клинике трансплантаций АЛС используют всегда в комплексе с другими иммунодепрессивными веществами (см.). Включение АЛС в комплекс иммунодепрессивной терапии увеличивает длительность выживания почечных трансплантатов, взятых от живых родственных доноров. В тех случаях, когда применение АЛС в общей схеме нммунодепрессии существенно не удлиняло сроков жизни почечного трансплантата, оно тем не менее было полезным, т. к. позволяло снижать дозу кортикостероидов и, следовательно, уменьшать частоту возникновения инфекционных осложнений.

Человеку АЛС вводят внутримышечно, подкожно, внутривенно. Первой инъекции АЛС должна предшествовать проба по Безредке на повышенную чувствительность. Внутримышечное и подкожное введение АЛС иногда сопровождается чувством жжения и болью в месте введения, припухлостью, покраснением, подъемом t° до 38-39°. Внутривенное введение (медленное, капельным методом) безболезненно, однако в определенной степени рисковано из-за возможности развития анафилактического шока или токсических изменений в почке. Однократное введение АЛС вызывает лимфопению, заметную уже через 5 мин. после инъекции. Число лимфоцитов в период 4-12 час. после инъекции снижается на 20-80%; нормализация наступает через несколько суток; параллельно лимфопенин иногда развивается лейкопения. При длительном введении АЛС число лимфоцитов устанавливается на определенном уровне и может вернуться к исходным цифрам.

При трансплантации почки реципиенту вводят 3-10 мл антилимфоцитарного γ-глобулина в день (соответственно в пересчете на белок). Схемы использования различны, наиболее употребима следующая: ежедневно в течение двух недель перед трансплантацией и затем каждые два дня в течение месяца после пересадки почки, обязательно с азотиоприном (имураном и кортикостероидами); введение последних прекращается с 3-й недели. Применение АЛС может быть удлинено в зависимости от характера трансплантата (родственный, от трупа и т. д.) и состояния реципиента.

Побочные действия и осложнения.

1. Длительное введение АЛС может вызвать патологические изменения в паренхиматозных органах, а также вследствие тромбопенического действия сопровождаться внутренними кровоизлияниями. Перед использованием АЛС в лечебных целях проводят пробы на токсический и геморрагический эффекты, заключающиеся в многократном введении (7-8 дней) АЛС мелкому лабораторному животному с последующим гистологическим обследованием паренхиматозных органов и с учетом внутренних кровоизлияний. 2. Введение гетерологичного глобулина (в виде АЛС или антилимфоцитарного γ-глобулина) сопровождается появлением преципитинов, направленных к белкам животного-продуцента. Этот процесс ускоряет элиминацию АЛС из организма, что было доказано с использованием радиоактивной метки. Кроме того, преципитаты иммунного комплекса, осаждаясь в трансплантированном органе (почке), могут явиться причиной поражений почек.

3. Нек-рые партии АЛС обладают пирогенным действием (подъем t° до 38-39°), вызывают припухлость, отечность и гиперемию в месте инъекции. См. также Цитотоксины.

Библиогр.: Краскина Н. А., Холчев Н. В. и Лопатина Т. К. Характеристика депрессивного действия антилимфоцитарной сыворотки и антилимфо-цитарного глобулина на продукцию антител у мышей, Журн. микр., эпид. и иммун., № 2, с. 83, 1971; Медавар П. Б. Биологическое действие гетерологичных антилимфоцитарных сывороток,в кн.: Пересадка органов и тканей у человека, под ред. Ф. Рапапорта и Ж. Доссе, пер. с англ., с 411, М., 1973, библиогр.; Balner H. In vivo evaluation of antihuman lymphocyte sera, Fed. Proc., v. 29, p. 117, 1970; James K. Anti-lymphocytic antibody, Clin. exp. Immunol., v. 2, p. 615, 1967, bibliogr.; Metchnikoff E. Etude sur la resorption des cellules, Ann. Inst. Pasteur, t.l3,p. 737, 1899; Starzl T. E. Heterologous antilymphocyte globulin, histoincompatibility matching, and human renal homotrans-plantation, Surg. Gynec. Obstet., v. 126, p. 1023, 1968, bibliogr.; Traeger J. e. a. Utilisation chez l'homme de globulines antilymphocytaires, Minerva nefrol., t. 15, p. 96, 1968, bibliogr.; Woodruff M. F. A. Immunosuppression by antilymphocytic serum, в кн.: Organ transplantation today, ed. by N. A. Mitchison a. o., p. 90, Amsterdam, 1969; Woodruff M. F. A. a. Anderson N. F. The effect of lymphocyte depletion by thoracic duct fistula and administration of antilymphocytic serum on the survival of skin homografts in rats, Ann. N. Y. Acad. Sci., v. 120, p. 119, 1964.

Ю. М. Зарецкая

Источники:

1. Большая медицинская энциклопедия. Том 2/Главный редактор академик Б. В. Петровский; издательство «Советская энциклопедия»; Москва, 1975.- 608 с. с илл., 8 л. вкл.