АДЕНОВИРУСЫ

Расстановка ударений: АДЕНОВИ`РУСЫ

АДЕНОВИРУСЫ (греч. adēn — железа + вирусы) — группа возбудителей респираторных и других заболеваний, включающая около 50 разновидностей (серотипов), выделенных от людей, обезьян, собак, рогатого скота, грызунов и птиц. Резистентны к действию эфира и кислот, обладают общим групповым комплементсвязывающим антигеном, эпителиотропны.

Вызывая по преимуществу заболевания дыхательных путей, А., в отличие от других респираторных вирусов, значительно чаще поражают другие системы организма: конъюнктиву, лимф, узлы, жел.-кшп. тракт (см. Аденовирусные болезни). Легко преодолевая желудочный барьер в связи с резистентностью к кислотам, А. интенсивно размножаются в кишечнике.

Первые штаммы А. стали известны благодаря исследованиям Роу, Хюбнера, Гилмора, Парротта и Уорда (W. P. Rowe, R. J. Huebner, L. Gilmore. R. Parrott, Т. Е. Ward, 1953), посвященным изучению цитопатогенного агента, выделенного из аденоидной ткани человека. Аденоидная ткань, извлеченная оперативным путем, культивировалась во вращающихся пробирках в среде, содержащей смесь коровьей амниотической жидкости (85%), эмбрионального экстракта (10%) и сыворотки (5%). Было замечено, что в такой культуре происходит спонтанная дегенерация клеток на 7—10-й день наблюдения. Последующие пассажи дегенерировавшей ткани на клетках перевиваемой линии HeLa и других тканях выявили наличие вируса, обладающего своеобразными свойствами. Выделенные новые штаммы вируса от клинически здоровых детей были отнесены к группе «латентных» и получили название «агентов аденоидной дегенерации». Вскоре было установлено, что такие же вирусы часто обнаруживаются не только в аденоидной ткани и миндалинах клинически здоровых детей, но и выделениях больных острым фарингитом и конъюнктивитом. Тогда вирусы получили второе название «аденоидно-фаринго-конъюнктивальных вирусов».

Независимо от первых исследователей Хиллеман и Вернер (М. R. Hilleman, J. H. Werner, 1954), изучая этиологию заболеваний органов дыхания у военнослужащих, нашли, что часть заболеваний, протекающих по типу острых катаров дыхательных путей и атипичных пневмоний, связана с новым, ранее неизвестным вирусом, названным R1-67. Этот вирус удалось выделить от больных и вырастить в культуре ткани, в частности в клетках HeLa. В дальнейшем обе группы исследователей показали сходство изучаемых вирусов и нашли, что они могут быть выделены как от здоровых людей, так и от больных различными заболеваниями с преимущественным поражением дыхательных путей.

Первоначальные названия вирусов были заменены в 1956 г. общим групповым названием «аденовирусы». В наст, время известно не менее 32 серотипов А., выделенных от человека.

А. имеют величину от 70 до 90 нм. Внутренняя структура вирусной частицы — вириона — состоит из наружной белковой мембраны и внутренних субъединиц величиной ок. 7 нм (рис. 1 и 2). Число субъединиц, называемых капсомерами, у всех исследованных А. имеет постоянную величину и равно 252. Вирионы имеют кубическую икосаэдральную структуру. А. содержат двунитчатую ДНК с мол. весом 20—25 млн. дальтон, составляющую 12—14% массы вириона с меньшим содержанием аденина и тимидина (43%), чем гуанина и цитозина (57%). В случае выраженной онкогенной активности (12-й и 18-й серотипы) соотношение гуанина к цитозину падает до 48—49% против 50—60% у неонкогенных А. Белок составляет 87% массы очищенного вириона с мол. весом менее 35000. Липиды, углеводы, собственные энзимы отсутствуют.

Рис. 1. Частицы аденовируса — вирионы (негативное контрастирование фосфорно-вольфрамовой кислотой)

Рис. 2. Внутренние субъединицы вириона — капсомеры (негативное контрастирование фосфорно-вольфрамовой кислотой)

Действие физических и химических факторов. А. инактивируются прогреванием при t° 56° в течение 5 мин. или 20—30 мин. при t° 50°; сохраняют активность в течение 7 дней при t° 36°, 14 дней — при t° 22—23°, 70 дней — при t° 4°. Устойчивы в кислой зоне рН от 6,5 до 3,0; при рН 1,5—2,5 частично инактивируются в течение 30 мин. при t° 36°. При комнатной температуре хорошо сохраняются в зоне рН от 6,0 до 9,5, более чувствительны к повышению щелочной, чем кислой, границы рН. Резистентны к органическим растворителям (эфиру, хлороформу, флуорокарбону), а также к трипсину, папаину, рибонуклеазе, дезоксирибонуклеазе и к желчи.

Антигенная структура. С помощью хроматографии и электрофореза выделены три различных растворимых антигена, отличающихся по иммунологическим свойствам и связанных с различными морфологическими субъединицами вируса.

1. А-антиген, гексон, — групповой, общий для всех серотипов вируса антиген, локализованный в 240 капсомерах капсида, каждый из к-рых граничит с шестью соседними капсомерами, что определило название антигена (hexon). Антитела против очищенного гексонного антигена нейтрализуют инфекционные свойства только гомологичного серотипа. В то же время эта сыворотка реагирует в реакции связывания комплемента с любыми гетерологичными серотипами, т. к. в составе гексонного антигена имеются две реактивные группы, одна из к-рых стимулирует образование группоспецифических, а другая — типоспецифических антител.

2. В-антиген, пентон, — токсический антиген, вызывающий округление и скучивание (агрегация) чувствительных клеток однослойной культуры и отделение клеток с поверхности стекла. Локализован в капсомерах, расположенных на вершине двенадцати угловых участков вириона, каждый из к-рых граничит с пятью соседними капсомерами (penton). Чувствителен к действию трипсина. Ингибирует активность интерферона (см.) и повышает тяжесть ассоциированных респираторных инфекций.

3. С-антиген — нитевой (fiber) антиген, имеет морфологически форму нити с узловым утолщением, прикрепленной к пентонному антигену. Представляет собой типоспецифический антиген, устойчив к действию трипсина, способствует адсорбции А. на эритроцитах обезьяны или крысы и их агглютинации.

Цикл размножения. Адсорбция А. на чувствительных клетках тканевой культуры занимает 4—6 час., после чего вирус проникает в цитоплазму с помощью пиноцитоза. Освобождение нуклеоида (депротеинизация) осуществляется в пиноцитарных вакуолях в течение 60—90 мин., вслед за чем вирусная ДНК транспортируется к ядру клетки. Латентный период репродукции продолжается от 13 до 15 час., когда в ядре синтезируется ДНК, а на цитоплазматических рибосомах — вирусные белки. Через 16 час. после заражения возникают зрелые структурные частицы, сборка к-рых происходит в ядрах клеток. Не более 10—15% вирусных ДНК и белков тканевой культуры используется для синтеза вирионов, вся остальная масса стимулирует поражения ядер клетки и нарушения синтеза клеточных ДНК и белков, с прекращением деления клеток через 10—11 час. после заражения культуры.

Максимальный выход вируса обеспечивается в случае массивного заражения и инкубации культуры до полного развития цитопатических поражений. Для получения максимального выхода вируса из достаточно сохранившихся клеток их разрушают повторным 3—6-кратным замораживанием и оттаиванием, гомогенизируют ультразвуком или механическим размалыванием. При этом концентрация вируса колеблется в зависимости от серотипа от тысяч до миллиардов частиц в 1 мл тканевой жидкости.

Размножение А. в тканевых культурах очень часто сопровождается параллельным развитием в ядрах клеток мелких вирионов диаметром около 200 А, икосаэдральной симметрии, получивших наименование адено ассоциированных вирусов (см.). По антигенной структуре и биологическим свойствам они не имеют ничего общего с аденовирусами. Размножение аденоассоциированных вирусов находится в полной зависимости от присутствия А., оказавшихся «помощниками» этих, не способных к самостоятельному развитию агентов.

Клеточные поражения. Зараженные аденовирусами клетки, округляются и формируют гроздевидные скопления различной величины, облегчающие распознавание агентов данной группы. Цитопатические изменения сопровождаются повышением гликолиза и скоплением органических кислот, подкисляющих тканевую жидкость. Клеточный лизис отсутствует и зараженные клетки длительное время сохраняют жизнеспособность.

Рис. 3. Цитопатогенное действие аденовирусов на перевиваемые клетки амниона человека: 1 — незараженные клетки

Рис. 3. Цитопатогенное действие аденовирусов на перевиваемые клетки амниона человека: 2 — начальная фаза дегенерации

Рис. 3. Цитопатогенное действие аденовирусов на перевиваемые клетки амниона человека: 3 — конечная фаза дегенерации

В процессе дегенерации клеток под действием А. различают две фазы (рис. 3): первая связана с токсическим эффектом, вторая — с истинным размножением вирусов, к-рое происходит внутри ядер и в цитоплазме. При этом А. образуют внутриядерные включения из вирусных частиц, к-рые составляют агломераты кристаллоподобного строения (рис. 4).

Рис. 4. Внутриядерное криеталлоподобное скопление аденовирусов (срез контрастировав уранилацетатом)

Электронномикроскопические исследования Перейры и Валентина (Н. G. Pereira, R. С. Valentine, 1958) показали, что одна цитопатогенная доза вируса содержит от 10 до 103 вирусных частиц.

Размножение в перевиваемых линиях клеток KB, HeLa, а также в почечных культурах обезьян под агаровым покрытием сопровождается формированием видимых глазом колоний (бляшек) в районе пораженных клеток.

Гемагглютинирующие свойства. Все серотипы А. человека, кроме типа 18, способны агглютинировать эритроциты обезьян резус или крыс. По этому признаку А. можно классифицировать на следующие четыре подгруппы: первая включает девять серотипов (3, 7, 11, 14, 16, 20, 21, 25, 28), агглютинирующих только эритроциты обезьян; вторая включает двенадцать серотипов (8, 9, 10, 13, 15, 17, 19, 22, 23, 24, 26, 27), агглютинирующих эритроциты крыс; третья — шесть серотипов (1, 2, 4, 5, 6, 12), агглютинирующих эритроциты крыс после взаимодействия с иммунной аденовирусной сывороткой против других типов (напр., 6 типа); четвертая включает серотип 18, не способный к гемагглютинации.

Патогенность для человека и животных. В отличие от других респираторных вирусов, А. размножаются не только в цилиндрическом мерцательном эпителии верхних дыхательных путей, трахеи и бронхов, но и в подслизистой оболочке. С участием А. наиболее часто связано развитие острой респираторной инфекции, протекающей с явлениями ангины, фарингита, кашля, озноба, боли в мышцах, головной боли, при непостоянном насморке и повышении температуры (см. Аденовирусные болезни, Респираторные вирусные болезни).

Наиболее частыми возбудителями оказались первые семь серотипов, а также типы 14 и 21. У грудных детей часто развиваются тяжелые пневмонии, изредка с летальным исходом, вызванные серотипами 1, 2, 3, 7 и 7а.

Еще недавно считалось общепризнанным положение об отсутствии у А. человека патогенности для животных.

Многочисленные опыты заражения многих видов млекопитающих, включая обезьян, давали либо отрицательные, либо сомнительные результаты. Это остается справедливым для обычных условий получения экспериментальной инфекции, однако при изменении методов исследования получены новые данные. Дженнингс и Беттс (A. R. Jennings, A. O. Betts, 1962) адаптировали аденовирусы 1, 2, 4 и 6 серотипов к культуре ткани свиной почки. Затем интратрахеально заражали поросят, рожденных и выращенных в стерильных условиях в безмикробной внешней среде. На 4-й день после заражения у большинства животных развилась бронхопневмония с выраженной лимфоидной гиперплазией.

Интраназальное или подкожное заражение взрослых сирийских хомяков, собак, кроликов, а также новорожденных мышей и крыс вирусами 3, 4, 5, 7, 12, 18 типов приводило к развитию бессимптомных инфекций.

Заражение новорожденных хомяков серотипом 5 вызывало, по данным Перейры, смерть животных через 4 дня с типичными поражениями легких и выделением вируса. Патогенность для обезьян выделяющихся от них А. не доказана.

В ряде лабораторий нередко выделяются А. от больных вирусным гепатитом как из кала, так и из крови. Возможно, А. являются спутниками истинного возбудителя, но нельзя исключить и наличие у нек-рых штаммов определенного гепатотропизма. Заслуживает внимания работа Л. Г. Руденко и др. (1972), где показана восприимчивость новорожденных хомяков в возрасте до 5 сут. к аденовирусу 1 типа (штамм 1237) при подкожном заражении. У зараженных хомяков развивается гепатит и происходит избирательная репродукция вируса в печени.

Онкогенные свойства. Способность А. человека вызывать развитие злокачественных опухолей (сарком) у новорожденных сирийских хомяков, зараженных подкожно массивной дозой активного вируса, впервые выявлена у серотипа 12. Онкогенные свойства подтверждены сейчас у семи других типов А. человека, а также у шести типов от обезьян и у одного от птиц. Наибольшую активность проявили серотипы 12, 18 и 31; тип 12 вызывал опухолевый рост, помимо хомяков, также у новорожденных крыс, диких африканских грызунов Mastomys и нек-рых линий мышей. В образовавшихся опухолях инфекционные частицы А. отсутствовали.

Злокачественная трансформация клеток наблюдалась также в опытах in vitro при заражении типом 12 нормальных эпителиальных клеток культуры почек новорожденных сирийских хомяков, а также фибробластов зародыша крысы. Через 3—10 нед. после инокуляции культур массивной дозой вируса развивался рост опухолевых клеток, свободных от инфекционного вируса. Клетки, трансформированные in vivo или in vitro, содержали два новых антигена: Т-антиген (неоантиген) и трансплантационный (TSTA) антиген. Их продукция индуцируется частью ДНК опухолеродного А. Весьма большой мол. вес ДНК аденовируса (более 20 млн. дальтон) обеспечивает возможность кодирования синтеза более 50 различных белков. Т-антиген, обнаруживаемый нерегулярно в ранние этапы обычной цитолитичекой инфекции, постоянно присутствует в опухолевых клетках и стойко передается при их культивировании in vitro. Обнаруживается в реакции связывания комплемента и по иммунофлуоресценции с сыворотками хомяков с развивающейся опухолью, к-рые не взаимодействуют со структурными белками вирусов. Т-антиген малоустойчив к нагреванию, воздействию кислоты и щелочи, не содержит РНК или ДНК, имеет мол. вес 78000 дальтон.

По антигенным свойствам различают Т-антиген группы А (высокоонкогенные аденовирусы 12, 18 и 31 серотипов) и группы В (слабоонкогенные аденовирусы 3, 7, 11, 14, 16 и 21 серотипов). Попытки обнаружить Т-антиген групп А и В в опухолевых клетках и гомологичные для них антитела в сыворотках людей, болеющих раком различной локализации, дали отрицательный результат. В опухолевой ткани хомяков этот антиген присутствует в весьма высокой концентрации и легко обнаруживается с помощью флуоресцирующих антител в каждой опухолевой клетке.

Выделение аденовирусов осуществляется заражением чувствительных тканевых культур отделяемым из полости носа, зева, конъюнктивы, а также кишечным содержимым. А. лучше размножаются (с развитием характерных цитопатических изменений) в перевиваемых эпителиальных культурах (HeLa, KB, HEp-2), а также в первичной культуре эмбриональной почки человека; слабее размножаются в первичных эпителиальных культурах человеческой трахеи, амниона, почечной ткани обезьян и кроликов. Оптимальный метод выделения — заражение первичной клеточной культуры эмбриональной почки человека с пассажами на перевиваемых линиях после адаптации вируса.

Серологическая идентификация выделенных штаммов. Для отнесения к группе А. выделенные агенты дифференцируются иммунологически путем установления общего группового антигена в РСК или в реакции преципитации (по методу диффузии в агаровом геле). Определение серотипа проводится с помощью реакции торможения гемагглютинации или нейтрализации. Для идентификации серотипа выделенного штамма определяют его принадлежность к одной из четырех подгрупп по гемагглютинации, после чего ставят реакцию торможения гемагглютинации (РТГА) с иммунными сыворотками кроликов или лошадей, обработанными каолином и истощенными чувствительными для данной подгруппы эритроцитами. Результаты РТГА проверяют в реакции нейтрализации на тканевых культурах с гомологичной иммунной сывороткой (см. Вирусологические исследования).

В современной классификации вирусов человека А. занимают самостоятельное положение среди ДНК-содержащих вирусов, четко дифференцируясь от других сочленов этой группы по свойствам вирионов.

Библиогр.: Руденко Л. Г. и др. Динамика репродукции аденовируса в печени новорожденных хомяков и изменение гуморальных факторов иммунитета при экспериментальном аденовирусном гепатите, Вопр. вирусол., № 3, с. 269, 1972; Смородинцев А. А. и Коровин А. А. Грипп, с. 73, Л., 1961, библиогр.; Шубладзе А. К. и др. Некоторые итоги изучения штаммов вирусов, выделенных от больных эпидемическим гепатитом, Вести. АМН СССР, № 6, с. 49, 1963; Buescher E. L. Respiratory disease and adenoviruses, Med. Clin. N. Amer., v. 51, p. 779, 1967; Enders J. F. a. o. Adenoviruses, Science, v. 124, p. 119,1956; Ginsberg H. S. Identification and classification of 'adenoviruses, Virology, v. 18, p. 312, 1962, bibliogr.; Hilleman M. R. a. Werner J. H. Recovery of a new agent from patients with acute respiratory illness, Proc. Soc. exp. Biol. (N. Y.), v. 85, p. 183, 1954, bibliogr.; Huebner R. J., Rowe W. P. а. Сhanосk R. M. Newly recognized respiratory tract viruses, Ann. Rev. Microbiol., v. 12, p. 49, 1958, bibliogr.; Pereira H. G. a. Valentine R. C. Infectivity titrations and particle counts of adenovirus type 5, J. Gen. Microbiol., v. 19, p. 178, 1958, bibliogr.; Rose H. M. Adenoviruses, в кн.: Diagnostic procedures for viral a. ricket. infections, ed. у E. H. Lennette a. N. J. Schmidt, p. 205, N'. Y., 1969; Rosen L. Hemagglutination-inhibition techniques for typing adenoviruses, Amer. J. Hyg., v. 71, p. 120, 1960; Sоhier R., Chardonnet Y. a. Prunieras M. Adenoviruses, Progr. med. Virol., v. 7, p. 253, 1965, bibliogr.

А. А. Смородинцев.

Источники:

1. Большая медицинская энциклопедия. Том 1/Главный редактор академик Б. В. Петровский; издательство «Советская энциклопедия»; Москва, 1974.- 576 с.